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    Estudio de liberación in vitro de péptidos opioides en terminales nerviosas aisladas
    (1995) Asai, Miguel; Agustín, Pablo; Benítez-King, Gloria; Laboratorio de Análisis Químicos. División de Neurociencias. Instituto Mexicano de Psiquiatría, Calz. México-Xochimilco 101, col. San Lorenzo Huipulco 14370, México, D.F.
    Actualmente se reconoce el papel modulador de los péptidos opioides en la homeostasis celular. Los péptidos opioides se han detectado por microscopia electrónica en vesículas electrodensas de las terminales nerviosas. También, se ha establecido que la liberación in vitro de encefalinas, a partir de rebanadas del cuerpo estriado es dependiente de calcio y se produce por la presencia de potasio como agente despolarizante. No obstante, los mecanismos moleculares que subyacen en la liberación de encefalinas no se conocen. Se sabe que el complejo calcio-calmodulina (Ca2+-CaM), participa en la liberación de neurotransmisores por la activación de la multiproteína cinasa II (MPKII). También se conoce que la proteína cinasa C (PKC), cuando es activada por PMA (éster de forbol), fosforila a la GAP-43 y a las MARCS presentes en las membranas de las vesículas sinápticas promoviendo la exocitosis. En el presente trabajo, se estudió la posible participación de la calmodulina (CaM) y PKC en la liberación in vitro de péptidos opioides, en terminales nerviosas aisladas (sinaptosomas), obtenidas de la amígdala del lóbulo temporal de la rata y se utilizó a la trifluoroperazina (TFP) y al compuesto W7 como antagonistas de la CaM y a un éster de forbol, el PMA como activador de la PKC. Un grupo de ratas macho de la cepa Wistar (200-250 g), se sacrificaron por decapitación, el cerebro se removió con rapidez y la amígdala se disecó y se colocó en sacarosa 0.32 M a 4°C. Una vez obtenidos los sinaptosomas se realizaron los experimentos de liberación, utilizando potasio (55 mM) como agente despolarizante y al dipéptido Phe-Ala (1 mM) como inhibidor de la encefalinasa. La recolección de las muestras se realizó cada 5 min (liberación basal, alto potasio y postestímulo). La concentración de IR-met-encefalina, IR-leu-encefalina, IR-ME-Arg6-Phe7 e IR-ME-Arg6-Gly7-leu8 fue medida con la técnica de radioinmunoensayo. Los resultados señalaron que el EGTA a una concentración de 1 mM, redujo significativamente la liberación de opioides (65%). La presencia del TFP y W7 en un margen micromolar redujo significativamente la liberación de met-encefalina, hepta y octapéptido; sin embargo, no tuvieron efecto sobre la liberación de leu-encefalina. Por el contrario, el PMA (1 µ M) aumentó significativamente la liberación de leu-encefalina (67%), pero no modificó la liberación evocada de met-encefalina. Los resultados indican que los péptidos opioides se liberan presinápticamente a partir de sus terminales nerviosas, su secreción es dependiente de calcio y de naturaleza selectiva. El complejo Ca2+ -CaM podría regular la liberación de met-encefalina, heptapéptido y del octapéptido y la PKC la liberación de leu-encefalina.
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    Liberación in vitro de la inmunorreactividad a met- y a leu- encefalinas en el ganglio periesofágico completo del caracol Helix aspersa
    (1993) Pellicer, Francisco; Asai, Miguel; León Olea, Martha; Sánchez-Álvarez, Marcela; Laboratorio de Neurofisiología del Instituto Mexicano de Psiquiatría
    Se estudió el mecanismo de liberación de material inmunorreactivo a met- y leu- encefalinas por el método de radioinmunoensayo (RIA) con antisueros altamente específicos, en el ganglio periesofágico del caracol Helix aspersa. La liberación se midió bajo tres distintas situaciones experimentales: a) liberación basal, b) durante la despolarización con alto potasio, y c) sin Ca2+. Los resultados muestran que los mecanismos de liberación estan presentes y son Ca2+ dependientes. Esta preparación es un buen modelo para investigar la liberación de peptidos opioides bajo condiciones fisiológicas y patológicas experimentales.
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    La melatonina induce la síntesis y liberación de las encefalinas en el cerebro de la rata
    (Instituto Nacional de Psiquiatría Ramón de la Fuente Muñiz, Calz. México-Xochimilco 101, Col. San Lorenzo Huipulco, Tlalpan, México, D.F. Tel. 4160-5000., 2010) Asai, Miguel; Valdés-Tovar, Marcela; Matamoros-Trejo, Gilberto; García, David; Laboratorio de Análisis Químicos. División de Investigaciones en Neurociencias. Instituto Nacional de Psiquiatría Ramón de la Fuente Muñiz; asaicm@imp.edu.mx
    En la actualidad se reconoce que el Sistema Endógeno Opioide (SEO) participa en la regulación y control de la homeostasis; por lo tanto se requiere que los procesos bioquímicos que dan lugar a su síntesis, liberación y unión a receptores se encuentren reguladas de manera endocrina. Diversas líneas de investigación han demostrado que la concentración y liberación presináptica de las encefalinas no permanece constante durante un ciclo de 24 horas. Por el contrario, su síntesis y liberación alcanzan su máxima concentración durante la fase de oscuridad y la mínima durante las primeras horas de la mañana. Recientemente, nuestro grupo de trabajo ha demostrado que la ausencia de melatonina (MEL), por efecto de la pinealectomía funcional, rompe el ritmo circádico y reduce significativamente la concentración de las encefalinas durante la fase de oscuridad. Si la ausencia de la hormona abate la concentración de opioides, es factible que la MEL se encuentre involucrada en la síntesis de las encefalinas. En el presente trabajo se muestran los resultados del efecto de la pinealectomía funcional sobre la concentración tisular y la liberación de los opioides, así como el efecto de la administración exógena de MEL y de su antagonista el luzindol (LZ).
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    Liberación in vitro de encefalinas durante la depresión postictal y la actividad interictal
    (1994) Asai, Miguel; Laboratorio de Análisis Químicos. División de Neurociencias. Instituto Mexicano de Psiquiatría
    Los péptidos opioides han sido propuestos como agentes inhibidores de la aparición, propagación y severidad de una crisis convulsiva. Su posible participando en los procesos epilépticos implica su liberación a partir de las terminales nerviosas que las contienen. El propósito del presente trabajo fue el de estudiar en diversas estructuras del cerebro de la rata, la liberación in vitro de encefalinas durante la fase ictal, depresión postictal y actividad interictal. Los experimentos se hicieron en ratas macho de la cepa wistar, las cuales fueron sometidas al kindling químico mediante la administración, por vía intraperitoneal, de una dosis diaria de 30 mg/kg de pentilenetetrazol, y fueron sacrificadas durante la fase ictal y de depresión postictal. La actividad interical se estudió al aplicar, en forma crónica, 50 UI de penicilina-G sódica en la amigadala del lóbulo temporal. La concentracción de encefalinas se midió por medio de la técnica de radioinmunoensayo. Los resultados obtenidos muestran que la liberación in vitro de encefalinas, provocada por potasio, aumenta significativamente durante la depresión postictal y la actividad interictal. El defecto es de naturaleza selectiva en cuanto a la estructura y el péptido analizado. Estos datos apoyan la hipótesis concerniente a la participación de las encefalinas en los mecanismos que subyacen en la depresión postictal y la actividad interictal.