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Item La trifluoperazina aumenta la concentración intracelular de calcio en neuronas de Helix aspersa(1993) Cruzblanca, Humberto; Márquez Gamiño, Sergio; Alvarez-Leefmans, Francisco Javier; División de Investigaciones en Neurociencias. Calz. México-xochimilco 101. col. San Lorenzo huipulco, 14370 México, D.F.Previamente reportamos que en las neuronas de Helix aspersa, la trifluoperazina (TFP) incrementa la inactivación de la corriente de calcio disparada por le Ca2+. En el presente trabajo se evaluó su efecto sobre la concentración intracelular de calcio iónico ([Ca2+]i) y sobre la velocidad de relajación de las corrientes de bario. Las corrientes de bario se registraron con la técnica de fijación de voltaje con dos microelectrodos. La [Ca2+)i] se estimó por microscopia de fluorescencia, utilizando como indicador intracelular a la molécula fluorescente Fura-2. La TFP incrementó la velocidad de relajación de la corriente de bario corfirmando que incrementa la inactivación de los canales de calcio aun cuando estos sean permeados por Ba2+. La TFP provocó un incremento oscilatorio de la [Ca2+]i probablemente debido a la inhibición de la bomba de Ca2+, que lo acumula activamente en el interior del retículo endoplásmico. Los resultados muestran que además de su acción antidopaminérgica, la TFP incrementa la [Ca2+]i. Dicho incremento puede contribuir a la inactivación de los canales de calcio.Item Efectos del CGS9343B, un inhibidor selectivo de la calmodulina sobre la corriente de calcio, en neuronas de Helix aspersa.(1990) Alvarez-Leefmans, Francisco Javier; Cruzblanca, Humberto; Departamento de Neurobiología, División de Neurociencias. Instituto Mexicano de Psiquiatría, México 14370, D.F. y Departamento de Farmacología y Toxicología. CINVESTAV del IPN. Apartado Postal 14-740, México 07000 D.F.En estudios anteriores (1,4,10) hemos encontrado que el antipsicótico trifluoperazine (TFP) reduce la amplitud de la corriente de Ca2+ (1 Ca 2+) y paralelamente incrementa su inactivación. Estos efectos pueden deberse a inhibición por la TFP de la calmodulina (CAM) o de la proteína cinasa C, o de ambas. En este trabajo reportamos los efectos del CGS9343B, un inhibidor + 2selectivo de la CAM (21) sobre le potencial de acción de Ca2+ y la 1Ca2+. Los experimentos se hicieron en neuronas identificadas de 3Helix aspersa bajo condiciones de fijación de corriente o fijación de voltaje. Las neuronas se bañaron con una solución diseñada para registrar la 1Ca2+ (10). La aplicación de 10 5m mM de CGS9343B provocó sobre el potencial de acción generado espontáneamente en estas neuronas, los siguientes efectos: i) la frecuencia de disparo se redujo en 85% (n=3) ; ii) se incrementó tanto la amplitud como la duración del potencial de acción, en un 25% y 22%, respectivamente (n=4). Cuando se registró la 1Ca2+ se observaron los siguientes efectos del CGS9343B: i) La amplitud de la 1Ca2+ se incrementó ostensiblemente (100% y 130% a 0 mV, n=2); - + 2ii) la inactivación de la 1Ca2+, disparada por el Ca2 +, se redujo. Estos resultados sugieren que la CAM regula los canales de Ca2+ al menos mediante dos procesos. En ambos casos, el resultado final es la reducción de la entrada de Ca2+ a las neuronas.Item Efectos de activadores de la proteína cinasa C sobre la corriente de calcio en neuronas del Helix aspersa(1988) Cruzblanca, Humberto; Regen, Chester; Alvarez-Leefmans, Francisco Javier; Departamento de Neurobiología. División de Neurociencias. Instituto Mexicano de Psiquiatría. México 14370, D.F. y Departamento de Farmacología y Toxicología, CINVESTAV del IPN. Apartado Postal 14-740, México 07000 D.F.En neuronas identificadas de Helix aspersa, el antipsicótico trifluoperazina (TFP), reduce la corriente entrante de Ca2+ [Ica2+], generada a partir de un potencial de fijación de -50 mV, y produce un incremento real en la inactivación de la Ica2+ dependiente del Ca2+ intracelular (7, 4, 2). La TFP, en el mismo rango de concentraciones (5 a 30 mM), inhibe tanto a la calmodulina (CAM) como a la proteína cinasa C (PCC), las cuales han sido implicadas en la modulación de la Ica2+. Para aclarar cuál de estos mensajeros está involucrado en los efectos de la TFP, es necesario evaluar la posible participación de la PCC en la modulación de la Ica2+ y en la inactivación de la misma por el Ca2+ intracelular en las neuronas. Para ello se estudió el efecto de los activadores de la PCC sobre la Ica2+ y su inactivación. Para registrar Ica2+, se usó la técnica de fijación de voltaje con dos microelectrodos, en las neuronas identificadas del ganglio subesofábico de Helix aspersa. Se sabe que estan neuronas constituyen un modelo fisiológico idóneo de las neuronas de los vertebrados, además de que a diferencia de estas últimas, permiten el registro de las corrientes iónicas transmembranales por muchas horas con mínimos cambios en la maquinaria bioquímica intracelular, a la vez que permiten, con relativa facilidad, la ejecución de una serie de maniobras farmacológicas. Para activar a la PCC se usó el éster de forbol 12-0-tetradecanoil-13-forbol acetato (TPA) y el oleoacetilglicerol (OAG). Se encontró que el TPA (10 a 30 nM) incrementó la Ica2+ para todos los valores de la curva corriente-voltaje. En el valor máximo de la Ica2+ (a + 10 mV), el incremento fue del 24.5%± 1.3% (X±E.E.; n=4). El OAG (25 mM) también aumentó Ica2+ mientras que el 4-a-forbol, un éster que no activa a la PCC, no tuvo efectos significativos. Estudiando la inactivación de la Ica2+ con un protocolo de 2 pulsos, se encontró que el TPA no la modifica. Los resultados sugieren que la PCC está involucrada en la regulación de la Ica2+, probablemente a través de los fosforilación de un sitio de la proteína que conforma a cada canal de Ca2+. La PCC no parece estar involucrada en el proceso de inactivación de la Ica2+ producida por el Ca2+.
